当前位置：首页 > 回收利用 > 正文

质粒可以回收利用吗

简述信息一览：

DNA纯化的主要目的是回收得到纯的目的DNA片段，去除影响DNA连接酶活性的物质以及其它的DNA片段。同样的纯化DNA片段的方法有多种，如电洗脱法、从低熔点或普通琼脂糖凝胶中回收、玻璃珠纯化柱层析以及硅胶吸附等方法。

性质不同，质粒纯化是质粒DNA，病毒纯化是病毒。进入细胞方式不同，质粒通过转染进入目的细胞，病毒通过感染进入目的细胞。发生功能的方式不同，质粒DNA所搭载的目的序列是DNA，并且DNA通常需要进入细胞核才能行使相应的功能。

（图片来源网络，侵删）

在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA，为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化，常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。另外，碱法提取的质粒DNA即使用RNA酶处理，仍会含有少量RNA。当有些试验需无RNA污染的DNA制品时，则需进行进一步纯化。

提高酶连效率：经过电泳和胶回收纯化的DNA片段具有更高的纯度和浓度，这样可以提高酶连反应的效率，使连接更加准确和有效。

你是怎么鉴定变成线性的？这种情况不太可能自己发生。

（图片来源网络，侵删）

需要，被切掉的部分同样带有粘性末端（因为粘性末端的碱基互补），会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法纯化，可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。

1、pET28a双酶切后连接目的基因什么也不长可以考虑对DNA进行定量。一般来说，设计一个连接反应，载体量最少需要50~100ng，而外源片段的分子数是载体分子数的3~10倍（具体质量取决于你的载体或外源片段的大小）。

2、既然你的质粒已经提出来了，那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。你看看双酶切后载体的位置有几条带，如果是两条，那说明酶切不完全，如果是一条，那说明酶切效率没问题。

3、建议你做一个双酶切看看，你的目的条带是不是成功连接上了。你的pET28a的酶切位点是哪个，是不是连接出现了问题。即使连接成功了，还有可能是你的基因需要加入诱导剂才会正常生长。该质粒上有lac调控区，你的菌需要诱导不，确认一下。

1、时常用紫外观察，目的带一旦进入，将其取出，混在低熔点胶里，稍微加热，加水即可用。什么？没低熔点胶？？那V型电泳槽有没，有的话将目的带切下，放到v型槽入口，v型槽内装入高浓度缓冲液，带目的带进入v型槽，吸出，乙醇沉淀后，加水就可以啦。

2、有些酶切产物酶切后仍为单一的 DNA片段，不需要进行跑胶回收，如目的基因PCR产物酶切后，往往只切除掉了几个保护碱基。这种情况下，直接向酶切产物中加入3倍体积的溶胶液GSB，按照后续步骤回收即可。若酶切体系小于100ul，建议先用ddH，O将体系补足至100ul。

3、建议用新胶，新TBC（TAC）重新跑一次，样品用醋酸铵重新纯化，电泳槽用缓冲液冲洗多次再用。另外可以在电泳槽周围放冰，降低电泳温度，并适当调低电压，因为高温对核酸降解也有促进作用。按你说的酶切结果清晰，回收反而降解，不是很常见，应该是混入内切酶的原因，另外，你也要检查一下回收胶的浓度。

4、回收前的条带比较清晰的话说明酶切产物没问题，你提到了盐浓度的问题，事实上样品盐浓度的确会对电泳影响很大，跑出来就会歪歪扭扭又弥散。如果真的想看回收得怎么样，那回收洗脱样品的时候可以用水来洗脱，这样盐浓度就没那么高了，对电泳影响也比较小。

5、不知道是不是我用的琼脂糖有问题，但是能再连上，你在溶的时候少溶点水，20-30ul左右就够了，65度预热，离完一次后把溶液再吸上来再洗一次，能稍好一点，完了不用检，也检不出来，直接与片段进行连接转化就是了，一般都能长出来，虽然不多，可是一个斑就够了。

1、在紫外照射下，将目的带切下来。用胶回收试剂盒回收。什么？没试剂盒？那低熔点胶有没？？在目的带的途中，挖坑，填上低熔点胶，时常用紫外观察，目的带一旦进入，将其取出，混在低熔点胶里，稍微加热，加水即可用。

2、胶回收应该换全新的电泳液去做凝胶电泳；小槽子要用80V的电压去跑；制胶要在0.7%的浓度；要视自己样的体积来选取梳子，因为小孔要尽量加样加满，充分利用胶。切胶尽量切小，但不能切掉条带，提高回收效率，就切四刀，干净利落；切胶后要用干净滤纸吸去水分；可用枪头捣碎胶块，加速溶解。

3、质粒可以直接跑胶吗一般是50ul的体系。胶回收50ul的体系就可以，酶各5质粒25buffer分别为5ul、10ul剩下用ddH2O补足50ul首先你的反应体系应该是对的，没有什么问题，做胶回收一般50ul的体系。质粒是一种环形DNA分子，常用于基因克隆、表达和转染等实验。

关于质粒可以回收利用吗，以及质粒可以用来干嘛的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。